При облучении замороженных водных растворов сывороточного альбумина и гемоглобина при •—180° Сведберг и Брохэлт [56, 57J не обнаружили ни расщепления белковых молекул, нн других изменений седиментационных свойств. Молекулы исследованных белков не имеют особой слабой точки, которая могла бы быть повреждена прямым действием с образованием заметных изменений при малых дозах. Александер и Чарлзби [55] показали, что сывороточный альбумин в сухом состоянии подвержен изменениям в результате прямого действия при облучении очень высокими дозами. Кениг и Перрингс [58] нашли, что рентгеновские лучи вызывают расщепление фибриногена с образованием как самых мелких фрагментов, так и больших агрегатов, в том числе нерастворимых.[2, С.224]
Как мы уже видели, облучение белков вызывает изменения их молекулярного веса. Фибриноген [58,70] при облучении образует небольшие фрагменты и большие агрегаты. Растворы сывороточного альбумина быка [61—63] образуют большие агрегаты без образования мелких фрагментов, что установлено седиментационным анализом в ультрацентрифуге. Облучение 0,07%-ного водного раствора рентгеновскими лучами дозой 75000 р при 25° вызывает преципитацию белка. Однако при 0е преципитации не происходит [62]. Выпадение белка можно замедлить или устранить повышением концентрации белка или добавлением солей. Это явление сходно с тепловой денатурацией.[2, С.227]
Давно известно, что облучение водных растворов белков изменяет спектры поглощения в ультрафиолетовом свете. На рис. 39 приведены данные Гузман Баррона [62], полученные при облучении сывороточного альбумина быка рентгеновскими лучами. Максимум поглощения при 2800 А в значительной мере обусловлен тирозином и частично триптофаном; максимум[2, С.225]
Реакции разрыва и сшивания и обусловленные ими изменения размеров и формы молекул отражаются на физических свойствах растворов облученных белков. При агрегации фибриногена [58, 70] и сывороточного альбумина быка [62, 63] обычно происходит увеличение вязкости растворов. Вязкость растворов овальбумина возрастает, если облучение проводится при изо-электрической точке или при низких рН, но уменьшается при высоких рН [75]. Мы видели, что уменьшение вязкости может сопутствовать увеличению молекулярного веса при образовании разветвленных структур; поэтому результаты, полученные при высоких рН, не обязательно отражают деградацию.[2, С.228]
Рядом исследователей было показано, что растворы различных высоко-полимеров являются истинными и подчиняются закону гетерогенного равновесия — правилу фаз Гиббса. Эти данные были получены для растворов яичного и сывороточного альбумина [1], длятаннина [2], мыл [3], желатины [4] и глобулина [5], а в последнее время — для растворов ацетилцеллюлозы [6], полистиролов [7] и поливинилхлоридов [8].[3, С.246]
Изложенный выше подход к анализу упаковки макромолекул может быть применен и к белковым молекулам. В табл. 4.4 показан аминокислотный состав пяти белков, для которых проведены соответствующие расчеты, — лизоцима, яичного альбумина, термолизина, рябонуклеазы и сывороточного альбумина. В таблице приведены ван-дер-ваальеовы объемы аминокислотных остатков (а не самих аминокислот), входящих в первичную структуру белка. Результаты расчета приводят к следующим значениям ван-дер-ваальсовых объемов белковых молекул: ли-зоцим—12526,9 А3, яичный альбумин — 38632,72А3, термолизин — 36 688,7 А3, рибонуклеаза — 12 071,0 А3, сывороточный альбумин— 58 105,65 А3. Молекулярная масса лизоцима, яичного альбумина и сывороточного альбумина человека составляет 14277, 42791 и 64427, а плотность в стеклообразном состоянии— 1,31; 1,27 и 1,27 г/см3. Отсюда коэффициенты молекулярной упаковки k равны: для лизоцима — 0,691, для яичного альбумина и сывороточного альбумина — 0,690. Эти величины соответствуют среднему значению коэффициента молекулярной упаковки в блочных стеклообразных полимерах.[1, С.141]
Р и с. 151. Фронтальный анализ смеси иммунного глобулина и сывороточного альбумина [114].[4, С.310]
Тенфорд [256] исследовал образование комплексов ряда металлов с белками сывороточного альбумина, измеряя уменьшение предельного полярографического тока, устанавливающегося при восстановлении иона металла. Это уменьшение можно использовать для определения белка, если раствор белка добавлять к стандартному раствору с известной концентрацией восстанавливающегося иона.[4, С.386]
Миллар [178, 179] исследовал полярограммы инсулина, пепсина, альбумина плазмы быка, химотрипсина и трипсина в 10~3 М буферном растворе СоС12 — NH4OH с рН 9,6. Результаты этого автора приводят к выводу, что все потенциалы белковых групп —SH можно исследовать полярографически. Существует строгая зависимость между величинами /^ (разности в величинах тока на плоской части полярографических волн) и общим потенциальным содержанием групп —SH в белках, однако эта зависимость нелинейна. Тропп и сотр. [121, 259, 260] показали присутствие двух каталитических волн в иативных и денатурированных фибрине, альбумине, глобулине, фибриногене, плазме и сыворотке. Обе ступени увеличиваются при тепловой денатурации в 10%-ной мочевине. Хата исследовал полярограммы сывороточного альбумина, яичного альбумина, а- и р-казеинов [91], фракционированных белков, выделенных из яичного белка [93], и овальбумина, денатурированного щелочью и мочевиной [94]. При фиксированном напряжении и одновременной автоматической записи тока как функции времени реакцию Брдички можно применять для малых объемов жидкости, вытекающей из хроматографической колонки. В 80%-ном насыщенном фосфатном буфере можно определить концентрацию белка до 0,003% [55].[4, С.396]
поглощения облученных водных растворов сывороточного альбумина целиком объясняется повышением рассеяния света в результате образования крупных агрегатов. Однако еще большее увеличение поглощения при облучении белка в «сухом состоянии» (хотя он еще и содержит 5% воды) не может быть объяснено таким путем; его следует приписать реакциям остатков тирозина. Очевидно, остатки тирозина поглощают преимущественно энергию излучения, но протекающие при этом реакции пока неизвестны.[2, С.226]
ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ МЕХАНИКА СТУДЕНТАМ!!! Задачи по теоретической механике из сборника курсовых работ под редакцией А.А. Яблонского, Кепе, Диевского. Быстро, качественно, все виды оплат, СМС-оплата.
А также: Готовые решения задач по теормеху из методичек Тарга С.М. 1988 и 1989 г. и задачника Мещерского. Решение любых задач по термеху на заказ.
Если Вам нужны решения задач по Физике из методички Чертова А.Г. для заочников, а также решебнки: Прокофьева, Чертова, Воробьёва и Волькинштейна. Решение любых задач по физике и гидравлике на сайте fiziks.ru
Что самое приятное на любом из этих сайтов Вы можете заказать решение задач по другим предметам: химия, высшая математика, строймех, сопромат, электротехника, материаловедение, ТКМ и другие.